Purificação da nucleosídeo trifosfato difosfohidrolase 1 (NTPDase 1) antigênica de Leishmania infantum

Autores/as

  • Ana Carolina Ribeiro Gomes Maia
  • Michelle de Lima Detoni
  • Leonardo Ramos Quellis
  • Gabriane Nascimento Porcino
  • Danielle Gomes Marconato
  • Nayara Braga Emídio
  • Laura Lavorato Soldati
  • Wagner Faria Messias
  • Anna Cecíllia Quirino Teixeira
  • Marcos José Marques
  • Priscila de Faria Pinto
  • Eveline Gomes Vasconcelos

DOI:

https://doi.org/10.34019/2179-3700.2018.v18.29857

Palabras clave:

NTDPase, ATP difosfohidrolase, Leishmaniainfantum, Leishmaniose visceral

Resumen

As NTPDases (nucleosídeo trifosfato difosfohidrolases) são enzimas que hidrolisam nucleosídeos di- e trifosfatados sob ativação de íons bivalentes. Uma atividade NTPDásica foi caracterizada em promastigotas de Leishmania infantum, um protozoário causador de leishmaniose visceral.Neste trabalho, a NTPDase 1 foi purificada de preparação de promastigotas usando como estratégia eletroforese em gel não-desnaturante e os detergentes deoxicolato de sódio e Triton X-100, os quais preservam a atividade fosfohidrolítica desta enzima. Após eletroforese, incubação do gel com ATP e inibidor de ATPases do tipo P permitiu a visualização de uma única banda com depósito branco de fosfato de cálcio. Esta banda ativa foi isolada e por SDS-PAGE e coloração pela prata foi identificada como polipeptídeos de 50 e 47 kDa. Por Western blot, os dois polipeptídeos foram reconhecidos pelo soro imune anti-LbB1LJ, o qual reconhece especificamente a porção N-terminal do domínio B de NTPDases 1 de Leishmania. Por espectrometria de massas, a identidade da NTPDase 1 foi confirmada pela identificação de seis peptídeos trípticos coincidentes com a NTPDase 1 anotada em seu genoma (NCBI gi|134068433), uma cobertura de 19% de sua sequência primária. As atividades ATPásica (555 ± 93 nmol Pi x mg-1 x min-1) e ADPásica (644 ± 38 nmol Pi x mg-1 x min-1) revelaram um índice de purificação de aproximadamente 62 vezes e uma razão de atividade ATPase/ADPase de aproximadamente 1, confirmando a efetividade desta estratégia para o isolamento da NTPDase 1 de promastigotas de L. infantum.

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.

Citas

ARAGÃO, Annelize Z. B. et al. Novel Processed Form of Syndecan-1 Shed from SCC-9
Cells Plays a Role in Cell Migration. PLoS ONE 7(8): e43521.
doi:10.1371/journal.pone.0043521, ago. 2012.
COIMBRA, Elaine S.et al. A Leishmania (L.) amazonensis ATP diphosphohydrolase
isoform and potato apyrase share epitopes: antigenicity and correlation with disease
progression. Parasitology, v. 135, p. 327-335, mar. 2008.
DETONI, Michelle L. et al. Galls from Calliandrabrevipes BENTH (Fabaceae:
Mimosoidae): evidence of apyrase activity contribution in a plant-insect interaction.
Australian Journal of Botany, v. 60, p. 559-567, set. 2012.
DETONI, Michelle L. et al. An antigenic domain of the Leishmaniaamazonensis nucleoside
triphosphate diphosphohydrolase (NTPDase 1) is associated with disease progression in
susceptible infected mice. Parasitology Research, v. 112, p. 2773-2782, ago. 2013.
FARIA-PINTO, Priscila et al. Mapping of the conserved antigenic domains shared between
potato apyrase and parasite ATP diphosphohydrolases: potential application in human
parasitic diseases. Parasitology, v. 135, p. 943-953, jul. 2008.
KNOWLES, Aileen F. The GDA1_CD39 superfamily: NTPDases with diverse functions.
Purinergic Signalling, v. 7, p. 21-45, mar. 2011.
MAIA, Ana C. R. et al.Occurrence of a conserved domain in ATP diphosphohydrolases
from pathogenic organisms associated to antigenicity in human parasitic diseases.
Developmental & Comparative Immunology, v. 35, p.1059-1067, out. 2011.
MAIA, Ana C. R. et al. An antigenic domain within a catalytically active
Leishmaniainfantum nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (NTPDase 1) is a target
of inhibitory antibodies. Parasitology International,v. 62, p. 44-52, fev. 2013.
MAIA, Ana C. R. G. Estudo da Nucleosídeo Trifosfato Difosfohidrolase (NTPDase 1)
de Leishmania infantum e expressão de uma nova proteína recombinante visando o
controle de parasitoses de interesse veterinário. Tese Acadêmica, Universidade
Federal de Juiz de Fora, Juiz de Fora, Minas Gerais, maio 2015.
MAIA, Ana C. R. G. et al. Leishmaniainfantum amastigote nucleoside triphosphate
diphosphohydrolase 1 (NTPDase 1): Its inhibition as a new insight into mode of action of
pentamidine. Experimental Parasitology, v. 200, p. 1-6, maio 2019a.
MAIA, Ana C. R. G. et al. Leishmaniainfantum nucleoside triphosphate
diphosphohydrolase 1 (NTPDase 1) B-domain: Antibody antiproliferative effect on the
promastigotes and IgG subclass responses in canine visceral leishmaniasis. Veterinary
Parasitology, v. 271, p. 38-44, jun. 2019b.
MARCONATO, Danielle G. et al. Antischistosome antibodies change NTPDase 1 activity
from macrophages. Parasite Immunology 39:e12487. https://doi.org/10.1111/pim.12487,
nov. 2017.
MENDES, Rita G. P. R. et al. Immunostimulatory property of a synthetic peptide belonging
to the soluble ATP diphosphohydrolase isoform (SmATPDase 2) and immunolocalization of
this protein in the Schistosoma mansoni egg. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v.
106, p. 808-813, nov. 2011.
PAES-VIEIRA, Lisvane et al. NTPDase activities: possible roles on Leishmaniaspp
infectivity and virulence. Cell Biology International, v. 42, p. 670–682, jan. 2018.
PORCINO, Gabriane N. et al. Leishmania (Viannia) braziliensis nucleoside triphosphate
diphosphohydrolase (NTPDase 1): localization and in vitro inhibition of promastigotes
growth by polyclonal antibodies.Experimental Parasitology, v. 132, p. 293-299, ago.
2012.
REZENDE-SOARES, Fabrícia A.et al. Cytochemical localization of ATP
diphosphohydrolase from Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes and
identification of an antigenic and catalytically active isoform. Parasitology, v. 137, p. 773-
783, abr. 2010.
TRAVI, Bruno L. et al. Canine visceral leishmaniasis: Diagnosis and management of the
reservoir living among us. PLoS Neglected Tropical Diseases 12 (1): e0006082.

Publicado

2020-03-04

Cómo citar

Maia, A. C. R. G., Detoni, M. de L., Quellis, L. R., Porcino, G. N., Marconato, D. G., Emídio, N. B., Soldati, L. L., Messias, W. F., Teixeira, A. C. Q., Marques, M. J., Pinto, P. de F., & Vasconcelos, E. G. (2020). Purificação da nucleosídeo trifosfato difosfohidrolase 1 (NTPDase 1) antigênica de Leishmania infantum. Principia: Caminhos Da Iniciação Científica, 18(1), 11. https://doi.org/10.34019/2179-3700.2018.v18.29857

Número

Sección

Artigos originais - Ciências Biológicas