Purificação da nucleosídeo trifosfato difosfohidrolase 1 (NTPDase 1) antigênica de Leishmania infantum

Authors

  • Ana Carolina Ribeiro Gomes Maia
  • Michelle de Lima Detoni
  • Leonardo Ramos Quellis
  • Gabriane Nascimento Porcino
  • Danielle Gomes Marconato
  • Nayara Braga Emídio
  • Laura Lavorato Soldati
  • Wagner Faria Messias
  • Anna Cecíllia Quirino Teixeira
  • Marcos José Marques
  • Priscila de Faria Pinto
  • Eveline Gomes Vasconcelos

DOI:

https://doi.org/10.34019/2179-3700.2018.v18.29857

Keywords:

NTDPase, ATP difosfohidrolase, Leishmaniainfantum, Leishmaniose visceral

Abstract

As NTPDases (nucleosídeo trifosfato difosfohidrolases) são enzimas que hidrolisam nucleosídeos di- e trifosfatados sob ativação de íons bivalentes. Uma atividade NTPDásica foi caracterizada em promastigotas de Leishmania infantum, um protozoário causador de leishmaniose visceral.Neste trabalho, a NTPDase 1 foi purificada de preparação de promastigotas usando como estratégia eletroforese em gel não-desnaturante e os detergentes deoxicolato de sódio e Triton X-100, os quais preservam a atividade fosfohidrolítica desta enzima. Após eletroforese, incubação do gel com ATP e inibidor de ATPases do tipo P permitiu a visualização de uma única banda com depósito branco de fosfato de cálcio. Esta banda ativa foi isolada e por SDS-PAGE e coloração pela prata foi identificada como polipeptídeos de 50 e 47 kDa. Por Western blot, os dois polipeptídeos foram reconhecidos pelo soro imune anti-LbB1LJ, o qual reconhece especificamente a porção N-terminal do domínio B de NTPDases 1 de Leishmania. Por espectrometria de massas, a identidade da NTPDase 1 foi confirmada pela identificação de seis peptídeos trípticos coincidentes com a NTPDase 1 anotada em seu genoma (NCBI gi|134068433), uma cobertura de 19% de sua sequência primária. As atividades ATPásica (555 ± 93 nmol Pi x mg-1 x min-1) e ADPásica (644 ± 38 nmol Pi x mg-1 x min-1) revelaram um índice de purificação de aproximadamente 62 vezes e uma razão de atividade ATPase/ADPase de aproximadamente 1, confirmando a efetividade desta estratégia para o isolamento da NTPDase 1 de promastigotas de L. infantum.

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Published

2020-03-04

How to Cite

Maia, A. C. R. G., Detoni, M. de L., Quellis, L. R., Porcino, G. N., Marconato, D. G., Emídio, N. B., Soldati, L. L., Messias, W. F., Teixeira, A. C. Q., Marques, M. J., Pinto, P. de F., & Vasconcelos, E. G. (2020). Purificação da nucleosídeo trifosfato difosfohidrolase 1 (NTPDase 1) antigênica de Leishmania infantum. Principia: Caminhos Da Iniciação Científica, 18(1), 11. https://doi.org/10.34019/2179-3700.2018.v18.29857

Issue

Section

Artigos originais - Ciências Biológicas