AVALIAÇÃO DO PAPEL DA PROTEÍNA FAK NA VIABILIDADE E APOPTOSE DE LINHAGEM CELULAR JAK2V617F POSITIVA, MODELO PARA NEOPLASIAS MIELOPROLIFERATIVAS CRÔNICAS

Resumo

As Neoplasias Mieloproliferativas Crônicas (NMPC) configuram-se como um grupo de doenças clonais da célula-tronco hematopoética que resultam em acúmulo das células mieloides. Dentre elas incluem-se a Policitemia vera (PV), a Trombocitemia essencial (TE) e a Mielofibrose Primária (MF). A identificação da mutação adquirida JAK2V617F em pacientes com PV, TE e MF permitiu o melhor entendimento da patogênese dessas doenças, visto que a ativação constitutiva da tirosina quinase JAK2 tem papel importante no aumento da proliferação celular e resistência à apoptose. No entanto, ainda não existe um tratamento farmacológico que leve todos os pacientes à remissão molecular, justificando o estudo de novos alvos moleculares. Por sua vez, a proteína Quinase de Adesão Focal (FAK), possui importante influência nos processos de proliferação, migração e sobrevivência celular e, por estar superexpressa em diversas neoplasias, configura-se um alvo promissor no desenvolvimento de fármacos contra o câncer. Nesse sentido, o presente estudo avaliou o efeito do inibidor da FAK (PF 562,271) na viabilidade da linhagem celular SET-2, positiva para a mutação JAK2V617F, como também na expressão de proteínas marcadoras para apoptose. Para tanto, utilizou-se ensaios de viabilidade com MTT e western blotting. Ainda, foi realizada a análise de um banco de dados público de RNAseq da linhagem SET-2 tratada com inibidor da JAK (INC424) por 4h e 48h, de forma a avaliar a expressão do gene PTK2 e mais 65 genes relacionados com proliferação, sobrevivência, apoptose e adesão, assim como a correlacionar a expressão desses genes. Essa análise foi feita utilizando os software Rstudio. Os resultados encontrados mostraram que o inibidor da FAK PF 562.271 reduziu significativamente a viabilidade celular e a proliferação das células SET-2, sendo 71,5%, 85,5%, 83,7% e 86,3% a redução da viabilidade para os tratamentos nas concentrações de 5 μM,10 μM, 25 μM e 50 μM, respectivamente. O inibidor também induziu apoptose, pois houve aumento na expressão de PARP clivada e Caspase 3 clivada após tratamento nas concentrações de 5uM e 10uM. As análises do banco de dados de RNAseq demonstraram que o inibidor da JAK modulou a expressão do gene PTK2 e de outros genes envolvidos nos processos de proliferação, apoptose, ciclo celular e adesão celular, sendo que 19 genes apresentaram expressão aumentada e 24 genes apresentaram expressão diminuída após tratamento por 48h com o inibidor da JAK. Ademais, PTK2 apresentou correlação significativa com 21 dos 65 genes analisados. Com isso, os resultados do presente trabalho apontam que a inibição da FAK sensibiliza a linhagem celular SET-2 a sofrer apoptose, reduzindo assim a viabilidade e o tratamento com o inibidor da JAK INC424 influencia na expressão do gene PTK2.